人白介素2(IL-2)ELISA試劑盒操作步驟

    人白介素2(IL-2)ELISA試劑盒的操作步驟主要基于?雙抗體夾心法?，其核心流程包括樣本處理、試劑準備、加樣孵育、洗滌顯色及結(jié)果分析等環(huán)節(jié)?。以下是具體步驟的詳細說明：

    一、樣本處理

    樣本類型?：適用于血清、血漿、組織勻漿、細胞上清液等生物樣本?。

    采集要求?：

    血清/血漿需使用無抗凝劑或EDTA/肝素抗凝的真空采血管，避免溶血或高血脂樣本?。

    血液凝固后離心分離血清，4℃短期保存（≤3天）或-20℃/-80℃長期保存，避免反復(fù)凍融?。

    稀釋建議?：若樣本濃度高于標準曲線最高值（如IL-2檢測上限為500pg/ml），需用標準品稀釋液預(yù)稀釋?。

    二、試劑準備

    回溫與溶解?：

    實驗前30分鐘將試劑盒及樣本置于室溫平衡。

    濃縮洗滌液若結(jié)晶，需37℃水浴溶解。

    洗滌液配制?：用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋為1倍工作液（如1ml濃縮液+19ml蒸餾水）?。

    標準品稀釋?：

    凍干標準品復(fù)溶后（如1000pg/ml），按梯度稀釋（如250、125、62.5…pg/ml）。

    復(fù)溶后未用完的標準品需分裝凍存，避免反復(fù)凍融。

    生物素化抗體工作液?：用檢測稀釋液將100倍濃縮抗體稀釋為1倍應(yīng)用液，現(xiàn)配現(xiàn)用。

    三、實驗操作步驟

    加樣與孵育?：

    每孔加入50μL標準品或待測樣本，設(shè)置復(fù)孔。

    加入50μL生物素化抗體工作液，封板后室溫孵育1小時。

    洗滌?：棄去孔內(nèi)液體，用1×洗滌液洗板5次，每次拍干殘留液體?。

    酶標物反應(yīng)?：每孔加入100μL鏈霉親和素-HRP溶液，避光孵育30分鐘。

    顯色與終止?：

    每孔加入100μLTMB底物液，避光顯色15分鐘?。

    加入50μL終止液（如2MH?SO?），溶液由藍變黃?。

    讀數(shù)?：終止后10分鐘內(nèi)，用酶標儀測定450nm（及630nm校正波長）的吸光度（OD值）?。

    四、結(jié)果分析

    標準曲線繪制?：以標準品濃度為橫坐標，對應(yīng)OD值為縱坐標，擬合四參數(shù)邏輯回歸曲線?。

    濃度計算?：根據(jù)樣本OD值代入標準曲線方程，計算IL-2濃度?。

    質(zhì)量控制?：板內(nèi)/板間變異系數(shù)應(yīng)<10%，確保實驗重復(fù)性?。

    注意事項

    避免污染?：使用一次性槍頭，防止交叉污染?。

    孵育時間?：嚴格按說明書控制，避免過度顯色或反應(yīng)不足?。

    樣本保存?：避免反復(fù)凍融，NaN?等防腐劑可能干擾檢測?。

    注：以上僅供參考，不作為實際數(shù)據(jù)，實驗需嚴格遵循說明或咨詢技術(shù)老師。

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